Elisa酶聯檢測

技術原理:

     酶聯免疫吸附試驗（又稱酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱 ELISA）利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；由于結合于固體承載物(一般為塑膠孔盤)上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計其鍵 結機制后，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用呈色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與鍵結機制的不同，ELISA可設計出各種 不同類型的檢測方式，主要以三明治法（sandwich）、間接法（indirect）、以及競爭法（Competitive）三種為主，以下為各種方法 之介紹。

 

三明治法

三明治法常用于檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:

•  將具有專一性之抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；
•  加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結；
•  洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結；
•  洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結；
•  洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果。 

三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，因此專一性相當高，但此待測抗原必須是多價抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心，所以并不適用于半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。

間接法

間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：

•  將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原；
•  加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結；
•  洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結；
•  洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含。量。

競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

•  將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；
•  加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結；
•  加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵。結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來；
•  洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺；
•  當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

結果判斷

定性測定

　　定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出”有”或”無”的簡單回答，分別用”陽性”、”陰性”表示。” 陽性”表示該標本在該測定系統中有反應。”陰性”則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這 種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的最高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的 深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。

定量測定

        ELSIA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考 標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線最高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數 紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測 區域。

測定小分子量物質常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中橫坐標為對數關系，這更有利于測定系統的表達。

服務內容

您需要提供以下材料：

細胞上清和血清等，試劑盒(可代購)。

您將獲得以下結果：

• （1）實驗數據；
• （2）數據分析；
• （3）實驗報告。